In situ melezleme belirli bir mRNA’nın doku içinde nerede bulunduğunu görmemize yarar. Bu metod inceleyenin ilgilendiği mRNA’nın normal yerini görmesine olanak sağlar.
In situ melezleme oldukca kolay bir tekniktir ve histolojik dokulardaki hedef mRNA’nın işaretlenmis nükleik asit probuna hibridizasyonunu sağlayarak dengeli hibridler oluşturur ve böylece probun yeri görülür.
Bu teknoloji ayrı türlerdeki hücre populasyonlarında gen anlatımı calısmak için kesin bir metoddur.Çünkü tek bir hücre çözünürlüğünde hedef mRNA’nın bulunmasına izin verir.
Kullanılan prob tipleri:
DNA probları:
Yüksek spesifik aktivite gösterir.
Prob olarak kullanılmadan önce denatüre edilmelidir.
RNA probları:
RNA-RNA hibridleri en stabil hibridlerdir.
RNA probları düsük stabilite gösterir ve RNaz’larla
kolaylıkla yok edilebilirler.
Oligonükleotid probları (15-50 nükleotid)
Dizi hedef diziye tamamlayıcı olarak dizayn edilir.
Problar çok stabildir.
Küçük boyutundan dolayı hedefe kolayca girebilir.
FISH
Floresan in situ hibridizasyon çoklu, sayı, yapı
ve mikrodelesyon gibi kromozom anomalilerini
saptamak için kullanılan bir metodtur.
Avantajları:
Sonuca hızlı ulaşılılır.
Bütün doku tiplerine uygulanabilir (kan, ilik vb.)
Standart sitogenetik metodlarla saptanamayan
delesyonları saptar.
Her prob kromozomun belli bir bölgesine özeldir ve floresan
molekülle işaretlenmiştir.
Her mikroskop lamı birçok metafaz içerir.
Her metafaz kromozomun tam bir setinden oluşur ve bu setin
küçük bir segmenti her bir prob tarafından aranır ve prob buraya baglanır.
Prop lam üzerine konulduktan sonra üstüne buharlasmayı
engellemek için lamel örtülür ve lamelin kenarlari iyice
kapatılır.Lamel 37 c lik inkubatore koyulur ve bir gece
boyunca bekletilir. Böylece prob hedef kromozomla
hibridize olur.
daha falz bilgi için aşağıdaki eklentiyi indiriniz
[/code]
tarafından güncellenmiştir.
